NY∕T 3310-2018 苏丹草和高丹草品种真实性鉴别 SSR标记法(农业)
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ID： |
6C5A86DFC9CA405180386BEA8E8F238C |
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文件大小(MB)： |
0.47 |
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页数： |
10 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-26 |
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ICS 65.120,B 25 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3310一2018,苏丹草和高丹草品种真实性鉴别,SSR标记法,Identification for variety genuineness of sudangrass and the,hybrid of sorghum and sudangrass-SSR marker method,2018-12-19 发布2019-06-01 实施,翻中华人民共和国农业农村部发布,目。昌,本标泊'按照GB/ T 1. 1-2009 纷出的规则起草,木标准由农业农村部畜牧兽医局提出,本标准IíI 全国畜牧业标准化技术委员会CSAC/ TC 274)归口,NY/T 33 10- 2018,本标If?起草单位.全国畜牧总站、农业农村部全国革业产品质量监督检验测试中心、青岛农业大学、,北京市农林科学院、新疆农业大学.,本标准主要起草人冯苍苍同、高秋、马金星、孙娟、庞斌双、王风格、张博、李存福、李玉荣、齐l烧、文1) 芳、,张义、闰敏、fi';德鹏、何珊珊、王梅娟,I,NY/T 3310- 20 18,苏丹草和高丹草品种真实性鉴别SSR 标记法,1 范围,本标准规定了利用SSR (Simp1 c Scqucncc Repcat ，简单重复序列冲击记，进行苏卅草[ Sοrgl川11- sudallell,se( Piper) Stapf. cv. ]及其杂交种高月革,的方法及判定规则,水标准适用,GB/ T 2930.,GB/ T 6682,3 原理,4. 1,4. 2,4. 3,4. 4,4. 5,4. 6 Taq DNA 聚合隅,4. 7 剥离lìE烧,4. 8 矿物前1 1 ,4. 9 DNA 分析仪用分子盘内标,4. 10 荧光索,4. 11 10X PCR 缓冲液(含Mg'勺,X Sorgl;川"川dane川e ) 品利'其实性鉴别,口,n 口,4.12 0.5 mol/L EDTA(pH 8. 0) 济液。称取18. 61 g 二水合乙二胶囚乙般二饷(Na， EDTA ?2 H， m 浴,于80mL 水中，用团体氢氧化例(Na0 1-[) 将p 1-1 调至8 . 0 ， j1O水定容至1 00 mL, t.~压灭菌.,4. 13 O. 5 mol/ L 盐般溶液， 1民25 mL 浓批自主( H CD . 如l水定容至500 mLo,4, 14 1 mol/L Tris- 1-[ C1 溶液( p1-1 8. 0) ， 称取12 . 11 g 三班甲基氨基甲炕[N [-[ ， C(C H ， O H ) 3J浴于适盘,水中，力[1 0 . 5 mol/ L 盐股溶液(4 . 13) 训iJ P 1-[ 至8 ， 0 ， 110水定容至100 mL ，高月'.灭菌,4, 15 CTA?提取液:称取81. 70 g 氯化创(Naα) 午11 20. ∞ g -，-六炕基三甲基澳化锁[~， 1-6 (CI也) ， NBrJ浴于,NY/ T 3310- 2018,水中，如l 入100 mL 1 mol/ L Tri s - HCI 济液C4. 14) ， 4 0 mL 0. 5 mol/ L 的EDT八浴液(4. 12) ， 加水定容至,1 0∞ mL，常油储存,4. 16 氯仿十异戊醉混合液: 将氛仿(C H CI， )和异戊醉(Cs H I2 O) 按24十1 的体积比例混合配制,4. 17 70 % 的乙自主溶液垠3 50 mL 无水乙醇C C， H， Ol!Jn水定容至500 mLo,4. 18 TE 级~I '液(p H 8. 0) ， J仅1 mL O. 5 mol/L EDT八裕液C 4. 1 2) 、5 mL 1 mo l/ L 的Tr i s- H CI(4.. 1 4),溶液， 加盐股调p [-[ 至8.0 ， lm水定容至500 m L， 高压灭菌,4. 19 dNTPs 浴液用超纯水分别配tlltl dA TP 、dGTP 、dCTP 、d TTP 终浓度1 00 mmol/ L 的储存浓. 各,i仅2 0 μ L 混合， 用超纯水720μL 定容至终浓度2. 5 mmol/ L 的工作液，高照灭菌， - 20 0C保存,4. 20 SSR 引物浴液， 用超纯水分别配制正向引物和I反向引物浓度为10 J.Lmo l/ L 的工作液,4. 21 亲和l破锐缓冲液: 取9 . 7 5 mL 无水乙醉(C' [-[ 12 ol 平~I 250μL 冰醋阪( C, [-1., 0, ) ，用去离子水定容,至50mL ,4. 22 亲和破;院::r.作液 将5μ L 亲和I @炕原液和1 mL 亲和础;皖缓冲液( 'L 2 1)混合,4. 23 10 X TBE 缓冲液: 称i权10 8.00 g 三段甲基氨基甲炕[ N H ， C (C[-[, 0 1-1), J 和55 . 00 g ~YI 酸,( H， BO，) 浴于水中，如I人37 mL O. 5 mol/ L EDT A 浴液(4. 1 2) ， 用蒸惚水定容至1 000 mL ，高压灭菌.,4. 24 l X TBE 缓冲液i仅500 m Ll OX TBE 缓冲液(4 . 23) ，用去离子水定容至5000 mL,4. 25 40 %丙烯酷胶溶液 称取1 90 . 00 g 丙烯m股(c， [-[ ， NOl和10 . 00 g 甲又双丙烯航胶[ (I-[, C=,CI-ICON [-1) , C[-[, J ，陷于400 mL 去离子……
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